發(fā)布日期：2020-08-29 19:52
包裝病毒的具體入侵進(jìn)程及防護(hù)的要點(diǎn)訣竅
包裝病毒
目標(biāo)基因不能直接整合到大多數(shù)真核細(xì)胞中。 常用的方法是將目標(biāo)基因包裝到病毒中以感染細(xì)胞，從而使Express滿足實(shí)驗(yàn)需要。 包裝病毒種類很多，常見的是慢病毒和腺病毒。
慢病毒是一種逆轉(zhuǎn)錄病毒。 構(gòu)建的siRNA / miRNA慢病毒載體，與化學(xué)合成的siRNA和基于瞬時(shí)表達(dá)載體的普通siRNA載體相比，一方面可以代替瞬時(shí)表達(dá)載體進(jìn)行擴(kuò)增。 另一方面，慢病毒-siRNA克隆由慢病毒包裝。系統(tǒng)打包后，可用于感染難以用傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系，例如原代細(xì)胞，懸浮細(xì)胞和非轉(zhuǎn)染細(xì)胞。 分裂狀態(tài)，并且可以在長時(shí)間感染后整合到感染細(xì)胞的基因組中。 表達(dá)穩(wěn)定。
慢病毒表達(dá)載體包含包裝，轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定整合所需的遺傳信息。 慢病毒包裝質(zhì)?？梢蕴峁┺D(zhuǎn)錄和包裝RNA到重組假病毒載體中所需的所有輔助蛋白。 為了產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒，有必要使用表達(dá)載體和包裝病毒的質(zhì)粒同時(shí)共轉(zhuǎn)染細(xì)胞。 病毒被包裝在細(xì)胞中。 包裝的假病毒顆粒被分泌到細(xì)胞外的培養(yǎng)基中，并且通過離心獲得上清液。 以后，它可以直接用于宿主細(xì)胞感染。
慢病毒載體基因組是正鏈RNA。 基因組進(jìn)入細(xì)胞后，通過其自身的逆轉(zhuǎn)錄酶在細(xì)胞質(zhì)中逆轉(zhuǎn)錄為DNA，形成DNA整合前復(fù)合體。 進(jìn)入細(xì)胞核后，DNA整合到細(xì)胞基因組中。 整合的DNA轉(zhuǎn)錄mRNA，然后返回包裝病毒的細(xì)胞質(zhì)以表達(dá)目標(biāo)蛋白或產(chǎn)生RNAi干擾。
不同的系統(tǒng)具有不同的包裝質(zhì)粒混合物。 以我們實(shí)驗(yàn)室的三質(zhì)粒系統(tǒng)為例。 包裝質(zhì)粒混合物包含比例為5：3：2的pMDL，VSVG和pRSV-Rev； 其中，pMDL包含編碼HIV病毒主要結(jié)構(gòu)蛋白的gag基因和編碼病毒特異性酶的pol基因。 pRSV-Rev包含rev基因，該rev基因編碼調(diào)節(jié)gag和pol基因表達(dá)的調(diào)節(jié)因子。 VSVG包含源自單純皰疹病毒的VSVG，這是病毒包裝所必需的?；颉?nbsp;
生物人類教育和培訓(xùn)基地位于由“嘉定工業(yè)區(qū)”和“中國科學(xué)院深圳先進(jìn)技術(shù)研究所”共同創(chuàng)建的“嘉定生物立方孵化生物園”。該基地?fù)碛型暾?ldquo;分子生物學(xué)”，“細(xì)胞生物學(xué)”，“代謝組學(xué)”和“包裝病毒”平臺，并設(shè)有標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)室，“ GMP級細(xì)胞室和病毒操作平臺”，“符合國家標(biāo)準(zhǔn)的臨床PCR檢測實(shí)驗(yàn)室”，并完成了分子和細(xì)胞生物學(xué)儀器的配置，初步投資為1500萬元人民幣，能夠進(jìn)行系統(tǒng)的分子生物學(xué)/細(xì)胞生物學(xué)和臨床科研技能的培訓(xùn)。
病毒轉(zhuǎn)染已成為基因功能研究的重要手段。傳統(tǒng)的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化效率低，無法獲得有效的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 病毒包裝服務(wù)通常要花費(fèi)數(shù)千甚至數(shù)萬元。 最好自己學(xué)習(xí)包裝。 我們在基因功能研究中使用最常用的過表達(dá)和RNA干擾來抑制病毒包裝被壓縮成為期2天的課程，以確保您可以在訓(xùn)練后熟悉相關(guān)操作，并可以在自己開始時(shí)自己動手 回去。 會議結(jié)束后，我們將與學(xué)生保持緊密聯(lián)系，回答學(xué)生在實(shí)際工作中遇到的問題，并確保您掌握技術(shù)！ 我們還包括一個(gè)包裝病毒的系統(tǒng)！ 關(guān)鍵是我們的團(tuán)隊(duì)向您承諾“一路走來”，這樣您的科學(xué)研究就不會孤單，并為您提供幫助！
調(diào)節(jié)病毒RNA基因組的逆轉(zhuǎn)錄，以確保mRNA的有效合成并調(diào)節(jié)病毒顆粒從細(xì)胞中的釋放。 它是HIV-1復(fù)制所必需的轉(zhuǎn)錄激活因子。 Tat蛋白是一種反式激活因子，當(dāng)與LTRRev上的響應(yīng)元件結(jié)合時(shí)，可以激活和促進(jìn)病毒基因：調(diào)節(jié)病毒蛋白的表達(dá)。 Rev是HIV-1復(fù)制所必需的。 缺乏Rev功能的原包裝病毒具有轉(zhuǎn)錄活性，但不能表達(dá)晚期基因，也不能產(chǎn)生病毒顆粒。
LTR：長末端重復(fù)序列（LTR）。 逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組的每個(gè)末端都有一個(gè)較長的末端重復(fù)序列（5'LTR和3'LTR），它不編碼蛋白質(zhì)，但含有啟動子。 調(diào)節(jié)劑，如增強(qiáng)劑。 病毒使用LTR將基因組整合到宿主基因組中。
順式作用元件位于基因的側(cè)面，可以調(diào)節(jié)影響基因表達(dá)的核酸序列。 包括發(fā)起人），增強(qiáng)子（增強(qiáng)子），響應(yīng)元件（響應(yīng)元件）等。其包裝病毒的活性僅影響與其本身在同一DNA分子上的基因。 它本身不編碼蛋白質(zhì)，并且可以與反式作用因子相互作用，參與基因表達(dá)調(diào)控。
